掌握方法合理使用ELISA试剂盒

　　ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)，已知浓度的规范品、不知道浓度的样品参加微孔酶标板内进行检查。先将生物素符号的抗体一起温育。洗刷后，参加亲和素符号过的HRP。再通过温育和洗刷，去掉未的酶物，然后参加底物A、B，和酶物一起效果。产生色彩。ELISA试剂盒色彩的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
 

　　ELISA试剂盒的使用方法：
 

　　一、双抗体夹心法
 

　　1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
 

　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
 

　　3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
 

　　4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
 

　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
 

　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
 

　　二、间接法
 

　　1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；
 

　　2.次日洗涤3次；
 

　　3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；
 

　　4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标二抗体(抗抗体)0.1ml；
 

　　5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；
 

　　6.较后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。