植物ELISA试剂盒在使用时有哪些要领而言呢？

　　植物ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物NADPH水平。用纯化的植物NADPH抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物NADPH，再与HRP标记的NADPH抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物NADPH呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中植物NADPH浓度。
 

　　植物ELISA试剂盒的操作步骤：
 

　　标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在二孔中分别加标准品100μl，然后在二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从二孔中各取100μl分别加到三孔和四孔，再在三、四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在三孔和四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为120U/L，80U/L，40U/L，20U/L，10U/L)。
 

　　加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
 

　　温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
 

　　配液：将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
 

　　洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
 

　　加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
 

　　温育：操作同3。
 

　　洗涤：操作同5。
 

　　显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
 

　　终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
 

　　测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。